指以水為包埋劑，利用致冷劑或冷凍裝置，將經(jīng)過固定或新鮮的組織塊進(jìn)行冰凍后在切片機(jī)上切成薄片制成玻片標(biāo)本的方法。此法不需要脫水、透明或浸蠟，能在10—15分鐘內(nèi)完成從取材到制成切片的一切步驟，并能保存組織內(nèi)某些易被有機(jī)溶劑溶解的物質(zhì)，防止組織的收縮和變形。適合于脂肪、神經(jīng)組織和其它組織化學(xué)的制片。
運(yùn)用冰凍切片法制片的步驟和要求是：第一步取材與固定。新鮮的組織塊可不經(jīng)過固定處理直接進(jìn)行冰凍后切片。為了切出薄片，一般多采用10%福爾馬林液固定。第二步切片。首先要安裝好切片機(jī)，將標(biāo)本臺用水濕潤到適宜程度后，將組織塊放在上面，并使組織塊凍結(jié)，同時調(diào)好切片的厚度和轉(zhuǎn)動標(biāo)本臺的升降把手，使冰凍的組織塊上端與切片刀口相接為止。當(dāng)組織塊表面呈輕微的溶化時即可開始切片，切下的切片附著在刀片上，可用濕潤的毛筆將它掃在盛水的培養(yǎng)皿中，切片要平推在水面或沉于水底。第三步貼片。要選擇較好的切片貼在載玻片上。蛋白甘油貼片法是先在載玻片上涂一層蛋白甘油(將蛋清調(diào)打成雪花狀泡沫，用雙層紗布過濾出透明的蛋白液，加等量甘油配成),然后將載玻片插入水中，把切片托起，用解剖針撥正位置。明膠貼片法是將切片浸入1%明膠溶液中幾分鐘，用載玻片托起，撥正位置，再浸入福爾馬林液中數(shù)分鐘，使明膠固定后用蒸餾水洗去福爾馬林。第四步染色與封藏。根據(jù)制片需要選擇適合于制片目的染色液和封藏劑，封藏保存。
使用冰凍切片法制片必須注意：①經(jīng)固定過的組織塊要水洗后才能進(jìn)行冰凍切片。②容易破碎的組織塊，在切片前要用明膠包埋。③冰凍切片可以不貼片進(jìn)行游離染色，也可以貼片后再染色。④用明膠包埋的切片，遇90%以上的酒精時會引起收縮，在染色和封藏時最好用水溶性的染料和封藏劑。